اوسٹیو ارتھرائٹس (OA) ہڈیوں کے جوڑوں کی طویل مدتی انحطاطی بیماریوں میں سے ایک ہے جو 65 سال سے زیادہ عمر کی آبادی کو متاثر کرتی ہے
1] عام طور پر، OA کے مریضوں کی تشخیص خراب کارٹلیج، سوجن سائنووئئم، اور ٹوٹے ہوئے کونڈروسائٹس کے ساتھ ہوتی ہے، جو درد اور جسمانی تکلیف کو متحرک کرتے ہیں۔
2] گٹھیا کا درد بنیادی طور پر سوزش کی وجہ سے جوڑوں میں کارٹلیج کے انحطاط کی وجہ سے ہوتا ہے، اور جب کارٹلیج کو شدید نقصان پہنچتا ہے تو ہڈیاں ایک دوسرے سے ٹکرا کر ناقابل برداشت درد اور جسمانی مشکلات کا باعث بنتی ہیں۔
3] درد، سوجن، اور جوڑوں کی سختی جیسی علامات کے ساتھ سوزش کے ثالثوں کی شمولیت اچھی طرح سے دستاویزی ہے۔ OA کے مریضوں میں، سوزش والی سائٹوکائنز، جو کارٹلیج اور سبکونڈرل ہڈی کے کٹاؤ کا سبب بنتی ہیں، synovial سیال میں پائے جاتے ہیں [
4] دو بڑی شکایات جو OA کے مریضوں کو عام طور پر ہوتی ہیں وہ ہیں درد اور synovial inflammation۔ لہذا موجودہ OA علاج کے بنیادی اہداف درد اور سوزش کو کم کرنا ہیں۔ [
5] اگرچہ دستیاب OA علاج، بشمول نان سٹیرائیڈل اور سٹیرایڈیل ادویات، نے درد اور سوزش کو کم کرنے میں افادیت کو ثابت کیا ہے، لیکن ان دوائیوں کے طویل مدتی استعمال سے صحت پر شدید اثرات مرتب ہوتے ہیں جیسے قلبی، معدے، اور گردوں کی خرابی [
6] اس طرح، اوسٹیوآرتھرائٹس کے علاج کے لیے کم ضمنی اثرات کے ساتھ زیادہ موثر دوا تیار کرنا ہوگی۔
قدرتی صحت کی مصنوعات محفوظ اور آسانی سے دستیاب ہونے کی وجہ سے تیزی سے مقبول ہو رہی ہیں۔
7] روایتی کوریائی ادویات نے گٹھیا سمیت کئی سوزشی بیماریوں کے خلاف افادیت ثابت کی ہے۔
8] آکلینڈیا لاپا ڈی سی۔ اپنی دواؤں کی خصوصیات کے لیے جانا جاتا ہے، جیسے درد کو دور کرنے اور معدے کو سکون دینے کے لیے کیوئ کی گردش کو بڑھانا، اور روایتی طور پر قدرتی ینالجیسک کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔
9] پچھلی رپورٹس بتاتی ہیں کہ A. lappa میں سوزش کی صلاحیت ہے [
10,
11]، ینالجیسک [
12]، کینسر مخالف [
13]، اور گیسٹرو پروٹیکٹو [
14] اثرات۔ A. lappa کی مختلف حیاتیاتی سرگرمیاں اس کے بڑے فعال مرکبات کی وجہ سے ہوتی ہیں: کاسٹونولائیڈ، ڈیہائیڈروکوسٹس لیکٹون، ڈائی ہائیڈروکوسٹونولائیڈ، کوسٹسلیکٹون، α-کوسٹول، سوسوریا لییکٹون اور کوسٹولیکٹون [
15] ابتدائی مطالعات میں دعویٰ کیا گیا ہے کہ کوسٹونولائیڈ نے لیپوپولیساکرائڈ (ایل پی ایس) میں سوزش کے خلاف خصوصیات ظاہر کیں، جس نے این ایف-کے بی اور ہیٹ شاک پروٹین پاتھ وے کے ریگولیشن کے ذریعے میکروفیجز کو آمادہ کیا۔
16,
17] تاہم، کسی مطالعہ نے OA علاج کے لیے A. lappa کی ممکنہ سرگرمیوں کی تحقیقات نہیں کی ہیں۔ موجودہ تحقیق نے OA کے خلاف (monosodium-iodoacetate) MIA اور acetic acid-induced rodent ماڈلز کے خلاف A. lappa کے علاج کے اثرات کی تحقیقات کی ہیں۔
Monosodium-iodoacetate (MIA) مشہور طور پر جانوروں میں درد کے زیادہ تر رویے اور OA کی پیتھو فزیولوجیکل خصوصیات پیدا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
18,
19,
20] جب گھٹنوں کے جوڑوں میں انجکشن لگایا جاتا ہے تو، MIA کونڈروسائٹ میٹابولزم کو خراب کر دیتا ہے اور سوزش اور سوزش کی علامات کو جنم دیتا ہے، جیسے کارٹلیج اور سبکونڈرل ہڈیوں کا کٹاؤ، OA کی بنیادی علامات۔
18] ایسیٹک ایسڈ کے ساتھ پیدا ہونے والے رد عمل کو وسیع پیمانے پر جانوروں میں پردیی درد کی تخروپن کے طور پر سمجھا جاتا ہے جہاں سوزش کے درد کو مقداری طور پر ماپا جا سکتا ہے [
19] ماؤس میکروفیج سیل لائن، RAW264.7، عام طور پر سوزش کے سیلولر ردعمل کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ ایل پی ایس کے ساتھ فعال ہونے پر، RAW264 میکروفیجز سوزش کے راستوں کو متحرک کرتے ہیں اور کئی سوزشی بیچوانوں کو خارج کرتے ہیں، جیسے TNF-α، COX-2، IL-1β، iNOS، اور IL-6 [
20] اس مطالعہ نے MIA جانوروں کے ماڈل، acetic ایسڈ سے متاثرہ جانوروں کے ماڈل، اور LPS- ایکٹیویٹڈ RAW264.7 خلیات میں OA کے خلاف A. lappa کے اینٹی nociceptive اور سوزش کے اثرات کا جائزہ لیا ہے۔
2. مواد اور طریقے
2.1 پلانٹ کا مواد
A. lappa DC کی خشک جڑ۔ تجربے میں استعمال کیا گیا ایپولپ فارماسیوٹیکل کمپنی، لمیٹڈ، (سیول، کوریا) سے حاصل کیا گیا تھا۔ اس کی شناخت پروفیسر ڈونگھن لی، شعبہ ہربل فارماکولوجی، کرنل آف کورین میڈیسن، گاچون یونیورسٹی نے کی تھی، اور واؤچر کا نمونہ نمبر 18060301 کے طور پر جمع کیا گیا تھا۔
2.2 A. lappa ایکسٹریکٹ کا HPLC تجزیہ
A. lappa ایک ریفلوکس اپریٹس (آست پانی، 100 ° C پر 3 h) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ نکالے گئے محلول کو کم دباؤ والے بخارات کا استعمال کرتے ہوئے فلٹر اور گاڑھا کیا گیا تھا۔ A. لپا کے عرق کی −80 °C کے نیچے منجمد خشک ہونے کے بعد 44.69% کی پیداوار تھی۔ A. lappa کا کرومیٹوگرافک تجزیہ 1260 InfinityⅡ HPLC سسٹم (Agilent, Pal Alto, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے منسلک HPLC کے ساتھ کیا گیا تھا۔ رنگین علیحدگی کے لیے، EclipseXDB C18 کالم (4.6 × 250 ملی میٹر، 5 µm، Agilent) 35 ° C پر استعمال کیا گیا تھا۔ نمونہ کے کل 100 ملی گرام کو 50٪ میتھانول کے 10 ملی لیٹر میں پتلا کیا گیا تھا اور 10 منٹ کے لئے سونیکیٹ کیا گیا تھا۔ نمونے 0.45 μm کے سرنج فلٹر (واٹرس کارپوریشن، ملفورڈ، MA، USA) کے ساتھ فلٹر کیے گئے تھے۔ موبائل فیز کمپوزیشن 0.1% فاسفورک ایسڈ (A) اور acetonitrile (B) تھی اور کالم کو اس طرح سے الگ کیا گیا تھا: 0-60 منٹ، 0%؛ 60-65 منٹ، 100%؛ 65-67 منٹ، 100%؛ 67–72 منٹ، 0% سالوینٹ B 1.0 ملی لیٹر/منٹ کے بہاؤ کی شرح کے ساتھ۔ 10 μL کے انجیکشن والیوم کا استعمال کرتے ہوئے بہاؤ کو 210 nm پر دیکھا گیا۔ تجزیہ سہ رخی میں کیا گیا تھا۔
2.3۔ جانوروں کی رہائش اور انتظام
5 ہفتے کی عمر کے نر Sprague – Dawley (SD) چوہے اور 6 ہفتے کی عمر کے نر ICR چوہے سمٹاکو بائیو کوریا (Gyeonggi-do، Korea) سے خریدے گئے تھے۔ جانوروں کو ایک کمرے میں مستقل درجہ حرارت (22 ± 2 ° C) اور نمی (55 ± 10%) اور 12/12 گھنٹے کے ہلکے/تاریک چکر کا استعمال کرتے ہوئے رکھا گیا تھا۔ تجربہ شروع ہونے سے پہلے جانوروں کو ایک ہفتہ سے زیادہ عرصے تک اس حالت سے واقف کیا گیا۔ جانوروں کو خوراک اور پانی کی اشتھاراتی فراہمی تھی۔ گاچون یونیورسٹی (GIACUC-R2019003) میں جانوروں کی دیکھ بھال اور ہینڈلنگ کے لیے موجودہ اخلاقی اصولوں پر تمام جانوروں کے تجرباتی طریقہ کار میں سختی سے عمل کیا گیا۔ اس مطالعہ کو تفتیش کار کے اندھے اور متوازی ٹرائل ڈیزائن کیا گیا تھا۔ ہم نے جانوروں کی تجرباتی اخلاقیات کمیٹی کے رہنما خطوط کے مطابق یوتھناسیا کے طریقہ کار پر عمل کیا۔
2.4 ایم آئی اے انجیکشن اور علاج
چوہوں کو تصادفی طور پر 4 گروپوں میں الگ کیا گیا تھا، یعنی شم، کنٹرول، انڈومیتھیسن، اور اے لاپا۔ 2% isofluorane O2 مکسچر کے ساتھ بے ہوشی کے باعث، چوہوں کو 50 μL MIA (40 mg/m؛ Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) کا استعمال کرتے ہوئے اندرونی طور پر گھٹنوں کے جوڑوں میں داخل کیا گیا تاکہ تجرباتی OA کی طرف لے جایا جا سکے۔ علاج ذیل میں کیے گئے تھے: کنٹرول اور شیم گروپس کو صرف AIN-93G بنیادی خوراک کے ساتھ برقرار رکھا گیا تھا۔ صرف، indomethacin گروپ کو AIN-93G غذا میں شامل indomethacin (3 mg/kg) فراہم کیا گیا تھا اور A. lappa 300 mg/kg گروپ کو A. lappa (300 mg/kg) کے ساتھ اضافی AIN-93G غذا کے لیے تفویض کیا گیا تھا۔ روزانہ کی بنیاد پر 15-17 گرام فی 190-210 گرام جسمانی وزن کی شرح سے OA شامل کرنے کے دن سے 24 دن تک علاج جاری رکھا گیا۔
2.5 وزن برداشت کرنے کی پیمائش
OA شامل کرنے کے بعد، چوہوں کے پچھلے اعضاء کی وزن برداشت کرنے کی صلاحیت کی پیمائش انکیپیسیٹینس-MeterTester600 (IITC لائف سائنس، ووڈ لینڈ ہلز، CA، USA) کے ساتھ شیڈول کے مطابق کی گئی۔ پچھلے اعضاء پر وزن کی تقسیم کا حساب لگایا گیا: وزن اٹھانے کی صلاحیت (%)
