موم بتی اور صابن بنانے کے لیے خالص ساپوشنکوویا ڈائیوریکاٹا تیل ریڈ برنر ڈفیوزر کے لیے نیا ہول سیل ڈفیوزر ضروری تیل

مختصر وضاحت:

 

2.1 ایس ڈی ای کی تیاری

SD کے rhizomes ایک خشک جڑی بوٹی کے طور پر Hanherb Co. (Guri, Korea) سے خریدے گئے تھے۔ کوریائی انسٹی ٹیوٹ آف اورینٹل میڈیسن (KIOM) کے ڈاکٹر گو-یا چوئی نے پودوں کے مواد کی ٹیکسونمک طور پر تصدیق کی۔ ایک واؤچر کا نمونہ (نمبر 2014 SDE-6) کورین ہربیریم آف سٹینڈرڈ ہربل ریسورسز میں جمع کرایا گیا تھا۔ SD (320 g) کے خشک rhizomes کو دو بار 70% ایتھنول (2 h reflux کے ساتھ) کے ساتھ نکالا گیا اور اس کے بعد نچوڑ کو کم دباؤ میں مرتکز کیا گیا۔ کاڑھی کو فلٹر کیا گیا تھا، لائو فلائز کیا گیا تھا، اور 4 ڈگری سینٹی گریڈ پر محفوظ کیا گیا تھا۔ خام ابتدائی مواد سے خشک عرق کی پیداوار 48.13% (w/w) تھی۔

 

2.2 مقداری ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) تجزیہ

کرومیٹوگرافک تجزیہ HPLC سسٹم (واٹرس کمپنی، ملفورڈ، MA، USA) اور فوٹوڈیوڈ سرنی ڈیٹیکٹر کے ساتھ کیا گیا تھا۔ SDE کے HPLC تجزیہ کے لیے، بنیادی-O-گلوکوسیلسیمفیوگین معیار کوریا پروموشن انسٹی ٹیوٹ برائے روایتی میڈیسن انڈسٹری (گیونگسان، کوریا) سے خریدا گیا تھا، اورسیکنڈ-O-گلوکوسیلہاموڈول اور 4′-O-β-D-گلوکوسیل-5-O-میتھیلویسیمنول کو ہماری لیبارٹری میں الگ تھلگ کیا گیا تھا اور اس کی شناخت سپیکٹرل تجزیوں کے ذریعے کی گئی تھی، بنیادی طور پر NMR اور MS کے ذریعے۔

ایس ڈی ای کے نمونے (0.1 ملی گرام) 70٪ ایتھنول (10 ملی لیٹر) میں تحلیل کیے گئے تھے۔ کرومیٹوگرافک علیحدگی XSelect HSS T3 C18 کالم (4.6 × 250 ملی میٹر، 5) کے ساتھ کی گئی تھی۔μm, Waters Co., Milford, MA, USA)۔ موبائل فیز 1.0 ملی لیٹر/منٹ کی بہاؤ کی شرح پر پانی میں ایسٹونائٹرائل (A) اور 0.1% ایسٹک ایسڈ (B) پر مشتمل تھا۔ ایک ملٹی اسٹپ گریڈینٹ پروگرام کو اس طرح استعمال کیا گیا: 5% A (0 منٹ)، 5-20% A (0-10 منٹ)، 20% A (10-23 منٹ)، اور 20-65% A (23-40 منٹ) )۔ کھوج کی طول موج 210–400 nm پر سکین کی گئی اور 254 nm پر ریکارڈ کی گئی۔ انجیکشن کا حجم 10.0 تھا۔μL. تین کرومونز کے تعین کے لیے معیاری حل 7.781 mg/mL (prim-O-گلوکوسیلسیمیفوگین)، 31.125 ملی گرام/ملی لیٹر (4′-O-β-D-گلوکوسیل-5-O-میتھیلویسمینول)، اور 31.125 ملی گرام/ملی لیٹر (سیکنڈ-O-گلوکوسیلہاموڈول) میتھانول میں اور 4 ° C پر رکھا جاتا ہے۔

2.3۔ سوزش کی سرگرمی کا اندازہوٹرو میں

2.3.1 سیل کلچر اور نمونہ علاج

RAW 264.7 خلیات امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (ATCC, Manassas, VA, USA) سے حاصل کیے گئے اور DMEM میڈیم میں اگائے گئے جس میں 1% اینٹی بائیوٹکس اور 5.5% FBS شامل ہیں۔ خلیوں کو 37 ° C پر 5% CO2 کے مرطوب ماحول میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ خلیات کو متحرک کرنے کے لیے، میڈیم کو تازہ ڈی ایم ای ایم میڈیم سے تبدیل کیا گیا، اور لیپوپولیساکرائیڈ (LPS، سگما-الڈرچ کیمیکل کمپنی، سینٹ لوئس، MO، USA) کو 1 پرμg/mL SDE کی موجودگی یا غیر موجودگی میں شامل کیا گیا تھا (200 یا 400μg/mL) اضافی 24 گھنٹے کے لیے۔

2.3.2 نائٹرک آکسائیڈ (NO)، پروسٹگینڈن E2 (PGE2)، ٹیومر نیکروسس فیکٹرα(TNF-α)، اور Interleukin-6 (IL-6) کی پیداوار

خلیوں کا علاج SDE کے ساتھ کیا گیا اور LPS کے ساتھ 24 گھنٹے کے لیے حوصلہ افزائی کی گئی۔ پچھلی تحقیق کے مطابق گریس ری ایجنٹ کا استعمال کرتے ہوئے نائٹریٹ کی پیمائش کرکے NO پیداوار کا تجزیہ کیا گیا تھا۔12] سوزش والی سائٹوکائنز PGE2، TNF- کا اخراجα، اور IL-6 کا تعین کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق ELISA کٹ (R&D سسٹم) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ NO اور cytokine کی پیداوار پر SDE کے اثرات کا تعین Wallac EnVision کا استعمال کرتے ہوئے 540 nm یا 450 nm پر کیا گیا تھا۔™مائکروپلیٹ ریڈر (پرکن ایلمر)۔

2.4 Antiosteoarthritis سرگرمی کا اندازہVivo میں

2.4.1 جانور

نر Sprague-Dawley چوہے (7 ہفتے پرانے) Samtako Inc. (Osan, Korea) سے خریدے گئے تھے اور 12-h روشنی/تاریک چکر کے ساتھ کنٹرول شدہ حالات میں رکھا گیا تھا۔°C اورنمی % چوہوں کو لیبارٹری خوراک اور پانی فراہم کیا گیا۔اشتھاراتی آزادی. تمام تجرباتی طریقہ کار نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ (NIH) کے رہنما خطوط کی تعمیل میں انجام دیئے گئے تھے اور ڈیجیون یونیورسٹی (Daejeon، جمہوریہ کوریا) کی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی کے ذریعہ منظوری دی گئی تھی۔

2.4.2 چوہوں میں MIA کے ساتھ OA کی شمولیت

مطالعہ کے آغاز سے پہلے جانوروں کو بے ترتیب بنایا گیا تھا اور علاج کے گروپوں کو تفویض کیا گیا تھا (فی گروپ)۔ MIA محلول (3 ملی گرام/50μL کا 0.9% نمکین) براہ راست دائیں گھٹنے کی انٹرا آرٹیکولر اسپیس میں اینستھیزیا کے تحت کیٹامین اور زائلازین کے آمیزے سے لگایا گیا تھا۔ چوہوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: (1) ایم آئی اے انجیکشن کے بغیر نمکین گروپ، (2) ایم آئی اے انجیکشن والا ایم آئی اے گروپ، (3) ایس ڈی ای سے علاج شدہ گروپ (200 ملی گرام/کلوگرام) ایم آئی اے انجیکشن کے ساتھ، اور (4) MIA انجیکشن کے ساتھ indomethacin- (IM-) علاج شدہ گروپ (2 mg/kg)۔ چوہوں کو زبانی طور پر ایس ڈی ای اور آئی ایم کے ساتھ 4 ہفتوں تک MIA انجیکشن سے 1 ہفتہ پہلے دیا گیا تھا۔ اس مطالعے میں استعمال ہونے والی SDE اور IM کی خوراک ان لوگوں پر مبنی تھی جو پچھلے مطالعات میں ملازم تھے [10،13،14].

2.4.3 ہندپاؤ وزن برداشت کرنے والی تقسیم کی پیمائش

OA شامل کرنے کے بعد، ہندپوں کی وزن اٹھانے کی صلاحیت میں اصل توازن بگڑ گیا تھا۔ ایک نااہلی ٹیسٹر (لنٹن انسٹرومینٹیشن، نورفولک، یوکے) وزن برداشت کرنے والی رواداری میں تبدیلیوں کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ چوہوں کو احتیاط سے ماپنے والے چیمبر میں رکھا گیا تھا۔ پچھلے اعضاء کے ذریعہ وزن اٹھانے والی قوت کا اوسط 3 سیکنڈ کی مدت میں لگایا گیا تھا۔ وزن کی تقسیم کا تناسب درج ذیل مساوات سے لگایا گیا: [دائیں پچھلے اعضاء پر وزن/ (دائیں پچھلے اعضاء پر وزن + بائیں پچھلے اعضاء پر وزن)] × 100 [15].

2.4.4 سیرم سائٹوکائن کی سطح کی پیمائش

خون کے نمونوں کو 1500 گرام پر 10 منٹ کے لیے 4 ° C پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا۔ پھر سیرم کو جمع کیا گیا اور استعمال ہونے تک −70 ° C پر محفوظ کیا گیا۔ IL-1 کی سطحβ, IL-6, TNF-α، اور سیرم میں PGE2 کو مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق R&D سسٹمز (Minneapolis, MN, USA) سے ELISA کٹس کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

2.4.5 ریئل ٹائم مقداری RT-PCR تجزیہ

ٹوٹل آر این اے گھٹنے کے جوائنٹ ٹشو سے TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا، جسے سی ڈی این اے میں الٹا نقل کیا گیا تھا اور ایس وائی بی آر گرین (اپلائیڈ بایو سسٹم) کے ساتھ ٹی ایم ون سٹیپ آر ٹی پی سی آر کٹ کا استعمال کرتے ہوئے پی سی آر ایمپلیفائیڈ کیا گیا تھا۔ , Grand Island, NY, USA)۔ ریئل ٹائم مقداری پی سی آر اپلائیڈ بایو سسٹم 7500 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم (اپلائیڈ بایو سسٹم، گرینڈ آئی لینڈ، NY، USA) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔ پرائمر کی ترتیب اور تحقیقات کی ترتیب کو ٹیبل میں دکھایا گیا ہے۔1. سی ڈی این اے کے نمونے اور مساوی مقدار میں جی اے پی ڈی ایچ سی ڈی این اے کو TaqMan® یونیورسل PCR ماسٹر مکسچر کے ساتھ تیار کیا گیا تھا جس میں DNA پولیمریز پر مشتمل مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق (Applied Bio Systems, Foster, CA, USA)۔ پی سی آر کے حالات 50 ° C پر 2 منٹ، 94 ° C پر 10 منٹ، 95 ° C پر 15 s، اور 40 سائیکلوں کے لئے 60 ° C پر 1 منٹ تھے۔ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق، ٹارگٹ جین کے ارتکاز کا تعین تقابلی Ct (ایمپلیفیکیشن پلاٹ اور تھریشولڈ کے درمیان کراس پوائنٹ پر تھریشولڈ سائیکل نمبر) کے طریقہ کار سے کیا گیا تھا۔

FOB قیمت:US $0.5 - 9,999 / ٹکڑا

کم از کم آرڈر کی مقدار:100 ٹکڑا/ٹکڑے

سپلائی کی صلاحیت:10000 ٹکڑا/ٹکڑے فی مہینہ